Ενσιτοκτόνη δράση και βιοεπίδραση ελέγχου του Autogra pha californica multiplenucleopolyhedrovirus (AcMNPV) στις προνύμφες των Spodoptera frugiperda

Αφηρημένη

Ο φθινοπωρινός στρατιώτης, Spodoptera frugiperda, είναι ένα από τα πιο σημαντικά παράσιτα στον αραβόσιτο, το οποίο εισέβαλε πρόσφατα στην Κίνα. Προκειμένου να προσδιοριστεί η επίδραση ελέγχου του Πολυεδρικός νουκλεοπολυεδρικός ιός Autographa californica (AcMNPV) σε προνύμφες του S.frugiperda, η εντομοκτόνος δράση και η επίδραση βιοελέγχου του AcMNPV στο S.frugiperda μελετήθηκαν και αναλύθηκαν με τις μεθόδους βιοδοκιμασίας και δοκιμής αποτελεσματικότητας πεδίου. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η διάμεση συγκέντρωση (LC)₅₀) του AcMNPV που ενεργεί στο 2^ndοι προνύμφες του S.Frugiperda ήταν 2,9x 10⁷PIB/mL. Η μέση αποτελεσματικότητα ελέγχου 10⁷Εναιώρημα PIB/mL AcMNPV+Bt (1500 mL/hm²) στο S.frugiperda ήταν 68,99% στις 10^ουημέρα και 66,87% στις 15^ουΗμέρα μετά τη χορήγηση. Τέλος, το λογισμικό DNAMAN 6.0 χρησιμοποιήθηκε για την αναγνώριση της ομολογίας DNA των νεκρών εντόμων και τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι αλληλουχίες των γονιδίων polh, lef-8 και lef-9 του νεκρού εντόμου και του S．Frugiperda ήταν 100 % πανομοιότυπα. Όλα τα παραπάνω αποτελέσματα θα μπορούσαν να επαληθεύσουν περαιτέρω ότι το AcMNPV μπορεί να διαδραματίσει βασικό ρόλο στον έλεγχο της S．frugiperda. Προτείνεται ότι 10⁷PIB/mL AcMNPV＋Bt εναιώρημα (1500mL/hm²)πρέπει να εφαρμόζεται στην αιχμή της εμφάνισης των νεαρών προνυμφών του S.frugiperda και μετά τις 4:00-5:00 μ.μ. την ηλιόλουστη μέρα για να αποφευχθεί η επίδραση της υψηλής θερμοκρασίας και του φωτός, ώστε το παρασκεύασμα του ιού να μπορεί να παίξει καλύτερα ρόλο και να βελτιώσει την επίδραση του ελέγχου στο S.frugiperda.

Λέξεις-κλειδιά: AcMNPV;Spodoptera frugiperda;Lepidopteranpest;καμπής;βιο-παρασιτοκτόνο?AcMNPV＋Αναστολή Bt;εντομοκτόνο δραστηριότητα?Πράσινη πρόληψη και έλεγχος

Το Spodoptera frugiperda είναι ένα παμφάγο μεταναστευτικό παράσιτο που εισήλθε για πρώτη φορά στην Κίνα από τη Μιανμάρ το 2019 και εξαπλώθηκε γρήγορα σε 1.518 περιοχές σε 26 επαρχίες και δήμους της Κίνας, αποτελώντας σοβαρή απειλή για την επισιτιστική ασφάλεια της Κίνας. Μέχρι τώρα, στη στρατηγική ελέγχου του Armyworm. ο έλεγχος της επιδημίας στρατιωτών εξακολουθεί να εξαρτάται από την έντονη χρήση χημικών φυτοφαρμάκων.Η υπερβολική χρήση χημικών φυτοφαρμάκων μπορεί εύκολα να προκαλέσει αντοχή στα παράσιτα, εκ νέου αχαλίνωτη και περιβαλλοντική ρύπανση.Μια σειρά από σοβαρά προβλήματα έχουν περιορίσει σοβαρά τη βιώσιμη ανάπτυξη της σύγχρονης γεωργίας. Ως εκ τούτου, η χρήση μεθόδων βιολογικού ελέγχου ή η υποκατάσταση βιοπαρασιτοκτόνων.Η χρήση φυτοφαρμάκων για τον έλεγχο του Armyworm γίνεται ολοένα και πιο σημαντική και έχει λάβει ολοένα και μεγαλύτερη προσοχή.

Το Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus AcMNPV είναι ένας πολύσπορος ενσωματωμένος πυρηνικός ιός πολυέδρωσης που απομονώνεται από την προνύμφη της μηδικής Argyria. Μπορεί να μολύνει περισσότερα από 30 είδη λεπιδόπτερων παρασίτων όπως ο σκόρος του τεύτλου, ο λαχανόσκωρος, το Argyria argyria. μικτού τύπου με Bt και άλλα εντομοκτόνα και μη στοχευόμενους ιούς παρασίτων ως συνεργιστικά έχει προφανή συνεργιστική δράση σε πολλά παράσιτα Noctuidae και διευρύνει περαιτέρω το εντομοκτόνο φάσμα και βελτιώνει την εντομοκτόνο δράση.Το AcMNPV είναι ένα νέο βιοπαρασιτοκτόνο για τον ιό των εντόμων που αναπτύχθηκε από την Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD.Είναι ένας συνδυασμός του ιού της πυρηνικής πολυέδρωσης Argyria alfalfa και του ισχυρού συνεργιστικού ιού Bt.Με καλή εντομοκτόνο δράση, το Α έχει εφαρμοστεί ευρέως σε λαχανικά, οπωροφόρα δέντρα, ρύζι και άλλους τομείς.Σε αυτό το άρθρο, η εντομοκτόνος δράση και το αποτέλεσμα βιοελέγχου του Autographa californica πολλαπλού πυρηνικού πολυεδρικού ιού (AcMNPV) έναντι του Spodoptera frugiperda ανιχνεύθηκαν και αξιολογήθηκαν με δοκιμασία εργαστηριακής δραστηριότητας και πείραμα πεδίου, προκειμένου να παρασχεθεί υποστήριξη δεδομένων για την ευρεία εφαρμογή του ιού της πυρηνικής πολυέδρωσης σε ο βιολογικός έλεγχος του Spodoptera frugiperda στο καλαμπόκι.Παρέχει θεωρητική βάση για την εγγραφή και την εφαρμογή του παράγοντα αναστολής του AcMNPV plus Bt στον έλεγχο του Armyworm.

1.Υλικά και μέθοδοι

1.1Δοκιμάστε ιούς και βιολογικούς παράγοντες

Ο ιός που δοκιμάστηκε ήταν Autographa californica πολλαπλός νουκλεοπολυεδροϊός (AcMNPV) Στις 20 Μαΐου 2019, το Spodoptera frugiperda συλλέχθηκε από το χωράφι με καλαμπόκι στην πόλη Xiantao της επαρχίας Χουμπέι και το τεστ προσυμπτωματικού ελέγχου μόλυνσης από τον ιό διεξήχθη στο εργαστήριο της Wuhan Technology Unioasis Biological Co. , Ε.Π.Ε.(Στην οποία ο πολυπυρηνικός πολυεδρικός ιός Autographa Californica AcMNPV έχει υψηλή μολυσματική δράση έναντι του Spodoptera frugiperda), οι προνύμφες του Spodoptera frugiperda ανατράφηκαν για να αυξηθούν και να πολλαπλασιαστούν. Οι νεκρές προνύμφες που μολύνθηκαν με τον ιό αλέστηκαν με νερό, διηθήθηκαν μέσα από 3 στρώματα φιλτραρίσματος φυγοκεντρήθηκε στα 600 r/min και 300r/min. Η μικρομέτρηση ήταν 1,8 × 10¹⁰λοιμώδη πολύεδρα ανά mL (Polyhedralinclusionbody PIB), δηλαδή, για να λάβουμε έναν καθαρό τεχνικό βαθμό ιού πολυέδρωσης (1,8 x 10¹⁰PIB/mL), διατηρούνται σε χαμηλή θερμοκρασία και αφήνονται στην άκρη.

Ο βιολογικός παράγοντας που δοκιμάστηκε ήταν η πυρηνική πολυεδρία Autographa california. Bacillus thuringiensis για σύντομο AcNPV.Bt (1,0 × 107 PIB/mL).Αναπτύχθηκε από την Wuhan Unioasis Bilogical Technology Co., LTD και παράγεται από τη θυγατρική της Wuhan Chuqiang Biological Technology Co., LTD.

1.2Δοκιμή εντόμων

Το πειραματικό έντομο ήταν το Spodoptera frugiperda.Στις 20 Ιουλίου 2019, οι προνύμφες του Spodoptera frugiperda συλλέχθηκαν από το θερινό χωράφι με καλαμπόκι στο χωριό Banqiao, στην πόλη Dachangzhen, στην κομητεία Tongshan, στην επαρχία Χουμπέι και μεταφέρθηκαν στο εργαστήριο του Ερευνητικού Ινστιτούτου Εδάφους Προστασίας Φυτών και Λιπασμάτων της Ακαδημίας Γεωργίας του Χουμπέι Επιστήμες. Φρέσκα και τρυφερά φύλλα καλαμποκιού τροφοδοτήθηκαν με μονή κεφαλή σε πλαστικά τρυβλία Petri μιας χρήσης (διάμετρος 8 cm, ύψος 3 cm).Οι συνθήκες τροφοδοσίας εσωτερικού χώρου ήταν: (25±1) ℃ και σχετική υγρασία 60%-70%, η φωτοπερίοδος είναι 16L:8D.Μετά από πολλαπλές γενιές αναπαραγωγής, τα φρέσκα και αποστειρωμένα μπλοκ αυγών διατηρούνται για χρήση.

1.3Εργαστηριακή δραστηριότητα του πολλαπλού νουκλεοπολυεδρικού ιού Autographa californica (AcMNPV) έναντι των spodoptera frugiperda

Έξι βαθμίδες συγκέντρωσης, 1,0 × 10⁹, 1,0 × 10⁸, 1,0 × 10⁷, 1,0 × 10⁶, 1,0 × 10⁵, 1,0 × 10⁴σχεδιάστηκαν σε αυτό το πείραμα. Αρχικά, η TC του AcNPV αραιώθηκε σε 1,0 × 10⁹PIB/mL, και στη συνέχεια αραιώθηκε 10 φορές για να ληφθούν άλλα αραιωτικά με διαφορετικές συγκεντρώσεις. Το πείραμα υποβλήθηκε σε επεξεργασία με τυφλό δείγμα ελέγχου. Πραγματοποιήθηκαν συνολικά 7 διεργασίες, με κάθε διαδικασία να επαναλαμβάνεται 3 φορές.

Υιοθετήθηκε η μέθοδος τροφοδοσίας τμημάτων φύλλων, δηλαδή, τα νεαρά φύλλα φρέσκου αραβοσίτου (μήκος 2 cm × πλάτος 2 cm) υποβλήθηκαν αρχικά σε επεξεργασία με σπρέι εναιωρήματος ιού, στη συνέχεια τροφοδοτήθηκαν οι προνύμφες και ταΐστηκαν με ένα κεφάλι σε τρυβλία Petri.Οι λωρίδες τροφοδοσίας ήταν: θερμοκρασία (25±1)℃, φάση προς υγρασία (60% ~ 70%), φωτοπερίοδος (16L:8D). Αφού καταναλωθούν τα τοξικά φύλλα καλαμποκιού, πρέπει να προστεθούν φρέσκα μη τοξικά φύλλα καλαμποκιού αμέσως. 48 προνύμφες δεύτερου σταδίου του Armyworm υποβλήθηκαν σε επανειλημμένη αγωγή. Μέρος αναφοράς 9{9-11} , Λαμβάνοντας υπόψη τις αλλαγές του πολλαπλασιασμού του ιού στα κύτταρα και τους ξενιστές της οικογένειας των σκώρων, ο αριθμός των νεκρών εντόμων λόγω του ιού και Ο συνολικός αριθμός των νεκρών εντόμων ερευνήθηκε στις 7 και 10 ημέρες μετά τη μόλυνση και υπολογίστηκε το ποσοστό θνησιμότητας και υπολογίστηκε το LC50.

1.4Δοκιμή πεδίου για την επίδραση ελέγχου 10 εκατομμυρίων εναιωρημάτων AcMNPV.Bt σε προνύμφες Armyworm

Η δοκιμή αποτελεσματικότητας στον αγρό διεξήχθη στο θερινό χωράφι καλαμποκιού του χωριού Xiaoyuan, στην πόλη Chuangwang, στην κομητεία Tongshan, στην επαρχία Hubei.Το οικόπεδο δοκιμής είναι συνολικά 1500μ², ο τύπος του εδάφους είναι ασβεστόχωμα, η τιμή του pH είναι 6,8, η περιεκτικότητα σε οργανική ουσία είναι 13,9%, και η γονιμότητα είναι μέτρια προς υψηλή. Το καλαμπόκι φυτεύεται όλο το χρόνο και η ποικιλία καλαμποκιού είναι Xiyu Νο. 3. Στις 13 Ιουλίου ,2020, σύνθετο λίπασμα 45% 750kg//hm²θα εφαρμοστεί ως λίπασμα βάσης και θα σπαρθεί.Από το 2019, έχει σημειωθεί σοβαρή εμφάνιση φθινοπωρινού στρατοσκώληκα σε αυτόν τον τομέα.

Συνολικά 10 εκατομμύρια εναιωρήματα AcMNPV.BT (1500mL/hm²) και βενζοϊκή εμμαμεκτίνη 15%. Εναιώρημα Indocarb (300mL/hm²), το συνήθως χρησιμοποιούμενο εντομοκτόνο και ο τυφλός έλεγχος αντιμετωπίστηκαν με 3 θεραπείες.Κάθε θεραπεία επαναλήφθηκε 4 φορές, με συνολικά 12 πειραματικά οικόπεδα, το καθένα από τα οποία κάλυπτε έκταση 100μ.²

Το απόγευμα της 26ης Αυγούστου 2020 (όταν εμφανίζονται συχνά οι προνύμφες του Spodoptera frugiperda), ψεκάστε το φυτοφάρμακο μία φορά το βράδυ.Χρησιμοποιείται το ηλεκτρικό σπρέι πλάτης πολλαπλών λειτουργιών μάρκας Lebang 3WBJ-16DZ, με πίεση εργασίας 0,40~0,60 MPa, διάμετρο στομίου 1mm και ταχύτητα ροής 60~85L/h.Η ημέρα εφαρμογής φυτοφαρμάκου είναι ηλιόλουστη, με θερμοκρασία 23-32 ℃.Διεξάγετε έρευνες την 1η, 3η, 5η, 7η, 10η και 15η ημέρα μετά την εφαρμογή.Κατά τη διάρκεια της έρευνας, λήφθηκαν 10 τυχαία σημεία δειγματοληψίας από κάθε οικόπεδο και 10 φυτά ερευνήθηκαν συνεχώς σε κάθε σημείο, συνολικά 100 φυτά.Καταγράφηκε ο αριθμός των ζωντανών εντόμων, οι θάνατοι, οι δηλητηριάσεις και οι φυσικοί εχθροί σε κάθε φυτό καλαμποκιού.Ο σχετικός τύπος υπολογισμού έχει ως εξής.

Μείωση ποσοστού εντόμου =(αριθμός ζωντανών εντόμων πριν από την εφαρμογή - αριθμός ζωντανών εντόμων μετά την εφαρμογή)/ αριθμός ζωντανών εντόμων πριν από την εφαρμογή

Αποτέλεσμα πρόληψης και ελέγχου=( Μείωση ποσοστού εντόμου στην περιοχή θεραπείας- Μείωση ποσοστού εντόμου στην περιοχή ελέγχου)/(100- Μείωση ποσοστού εντόμου στην περιοχή ελέγχου)*100%

1.5Μοριακή ταυτοποίηση του ACMNPV

1) Δοκιμή δειγμάτων ιού.Επιλέξτε το μητρικό υγρό ACMNPV για προσδιορισμό της δραστηριότητας σε εσωτερικούς χώρους (δείγμα 1), βιολογικό παρασκεύασμα 10 εκατομμύρια ACMNPV.Bt SC (δείγμα 2), πτώματα εντόμων μολυσμένα με ιό μετά από δοκιμή αποτελεσματικότητας πεδίου (δείγμα 3) και τις προνύμφες δεύτερης γενιάς στρατιωτών που έχουν μολυνθεί με πτώματα εντόμων που συλλέχθηκαν στο δείγμα 3 (δείγμα 4) ως δείγματα του ιού δοκιμής, για να επαληθευτεί εάν το AcMNPV στα 10 εκατομμύρια ACMNPV.Bt έχει βακτηριοκτόνο δράση κατά των προνυμφών πτωτικής στρατιάς.

2) Εξαγωγή DNA.Πάρτε 1,0 mL δείγματος AcMNPV, προσθέστε 99,0 mL απεσταγμένου νερού και ταλαντώστε καλά για 1 λεπτό.Πάρτε 300μL εναιώρημα μετά την ταλάντωση, προσθέστε 100μL αλκαλικό διάλυμα πυρόλυσης, υδατόλουτρο στους 37 ℃ για 30 λεπτά.Προσθέστε 200 μL ρυθμιστικού διαλύματος Tris·HCl και φυγοκεντρήστε με 10000 r/min για 8 λεπτά.Μεταφέρετε το υπερκείμενο σε σωλήνα φυγοκέντρησης, προσθέστε 5 μL Πρωτεάση Κ και 60 μ L SDS, υδατόλουτρο στους 65 ℃ για 2 ώρες, αφαιρέστε και ψύξτε σε θερμοκρασία δωματίου.Προσθέστε 650 μL Ανακατέψτε καλά κορεσμένη φαινόλη L Tris, φυγοκεντρήστε με 10000 r/min για 5 λεπτά και μεταφέρετε το υπερκείμενο σε νέο σωλήνα φυγοκέντρησης.Προσθέστε 650 μL μικτού υγρού μείγματος φαινόλης και χλωροφορμίου (αναλογία όγκου 1:1), φυγοκεντρήστε στα 10000 r/min για 5 λεπτά και, στη συνέχεια, πάρτε το υπερκείμενο σε νέο σωλήνα φυγοκέντρησης.Προσθέστε 650 μL μικτού υγρού χλωροφορμίου και ισοαμυλικής αλκοόλης (αναλογία όγκου 24:1), φυγοκεντρήστε στα 10000 r/min για 5 λεπτά και τέλος βάλτε το υπερκείμενο σε νέο σωλήνα φυγοκέντρησης.Μετρήστε τη συγκέντρωση του DNA χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο.

3) Ενίσχυση PCR.Χρήση τυπικού συστήματος T3 super mix: Δείγμα DNA 2 μ L. 0,5μL εκκινητές για πριν και μετά, T3 super mix 18μL και ddH2O7μL.Η συνθήκη ενίσχυσης PCR είναι 95 ℃.Μετά από 3 λεπτά προ της μετουσίωσης, εκτελούνται οι ακόλουθοι κύκλοι: 98 ℃ για 15 δευτερόλεπτα, 52 ℃ για 20 δευτερόλεπτα, 72 ℃ για 20 δευτερόλεπτα και τέλος 72 ℃ για 5 λεπτά, συνολικά 42 φορές κύκλο.

4) Ηλεκτροφόρηση γέλης DNA αγαρόζης.Πάρτε προϊόν ενίσχυσης PCR 2μL και 5 kb DNA Marker και βάλτε σε γέλη αγαρόζης και ηλεκτροφορήστε στα 180 V για 20 λεπτά.Μετά την ηλεκτροφόρηση, παρατηρήστε τα προϊόντα PCR στο σύστημα απεικόνισης γέλης.

Polh upstream primer:

AGGGTTTCCCAGTCACGGGCTGAG-GATCCTTT

Polh downstream αστάρι:

GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTG-CAAACTCCTT

Lef-8 upstream primer:

AGGGTTTCCCAGTCCACGCACGGGAAAT-GAC

Lef-8 κατάντη εκκινητές:

GAGCGGATAATTTCACATTGTACGGATCTTTCGGC

Lef-9 upstream αστάρια

AGGGTTTCCCAGTCACGAAACGGGTACGCGG

Lef-9 κατάντη εκκινητές:

GAGCGGATAATTTCACATTGTCACCGTCAGTC

Τέλος, εφαρμόστε το λογισμικό DNAMAN6.0 για να συγκρίνετε τις μετρημένες αλληλουχίες polh, lef-8 και lef-9.

1.6Ανάλυση και επεξεργασία δεδομένων

Η επεξεργασία των πειραματικών δεδομένων έγινε με τη χρήση λογισμικού στατιστικής ανάλυσης δεδομένων IBM SPSS 22.0.

Στο πείραμα προσδιορισμού της εντομοκτόνου δραστικότητας του ιού, μετράται ο αριθμός των νεκρών και ζωντανών εντόμων που υποβλήθηκαν σε αγωγή με κάθε συγκέντρωση, και το ποσοστό θνησιμότητας και το προσαρμοσμένο ποσοστό νεκρών υπολογίζονται και μετατρέπονται σε τιμές πιθανότητας.Η συγκέντρωση κάθε θεραπείας μετατρέπεται σε τιμές lg.Η εξίσωση παλινδρόμησης λοιμογόνου δράσης (κλίση ± SE) υπολογίζεται μέσω τιμών και βαρών πιθανοτήτων εργασίας και LC₅₀Η τιμή και το όριο εμπιστοσύνης του 95% και, τέλος, εκτελέστε τη δοκιμή chi-square (²).Στο πείραμα επίδρασης ελέγχου πεδίου, μετρήθηκε ο αριθμός των ζωντανών εντόμων σε κάθε θεραπεία, υπολογίστηκε ο ρυθμός μείωσης των παρασίτων.Το αποτέλεσμα ελέγχου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο επεξεργασίας του Microsoft Excel.Η μέθοδος του Duncan χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση και η μονόδρομη ANOVA χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση των σημαντικών διαφορών μεταξύ των θεραπειών,

Τα γραφήματα στο κείμενο δημιουργήθηκαν όλα χρησιμοποιώντας το λογισμικό Microsoft Excel.

2.Αποτελέσματα και Ανάλυση

2.1Εντομοκτόνος δράση του AcMNPV κατά των προνυμφών Spodoptera frugiperda

Τα αποτελέσματα της δοκιμής δραστηριότητας σε εσωτερικούς χώρους (Πίνακας 1) δείχνουν ότι μετά από 7 ημέρες θεραπείας, το LC₅₀του AcMNPV που δρα σε προνύμφες 2ου σταδίου του Spodoptera frugiperda είναι 4,1x10⁷PIB/mL και το LC₉₀είναι 1,05 x 10⁸PIB/mL.Μετά από 10 ημέρες θεραπείας, το LC₅₀του AcMNPV που δρα σε προνύμφες 2ου σταδίου είναι 2,9x10⁷PIB/mL και το LC₉₀είναι 7,8x10⁷PIB/mL.Το LC₅₀και LC₉₀Οι δράσεις του AcMNPV στις προνύμφες 2ου σταδίου του φθινοπωρινού σκουληκιού μετά από 7 ημέρες θεραπείας ήταν και οι δύο υψηλότερες από 10 ημέρες, υποδεικνύοντας ότι το AcMNPV επέδειξε καλή εντομοκτόνο δράση έναντι των προνυμφών Spodoptera frugiperda στις 7 ημέρες.

2.2 Επίδραση ελέγχου πεδίου του AcMNPV.Το Bt ενεργεί στις προνύμφες Spodoptera frugiperda

Τα αποτελέσματα δοκιμών αποτελεσματικότητας πεδίου έδειξαν ότι 10 εκατομμύρια AcMNPV.Bt SC (1500 mL/hm²) είχε σχετικά αργή επίδραση στις προνύμφες του spodoptera frugiperda.Η μέση επίδραση ελέγχου την 1η, 3η και 5η ημέρα μετά τον ψεκασμό ήταν 11,57%, 16,23% και 15,56% αντίστοιχα.Το μέσο αποτέλεσμα ελέγχου την 7η ημέρα μετά τον ψεκασμό ήταν μόνο 21,88%.Ωστόσο, τη 10η ημέρα μετά τον ψεκασμό, το αποτέλεσμα καταπολέμησης των εντόμων αυξήθηκε ξαφνικά στο 68,99%, και το μέσο αποτέλεσμα ελέγχου τη 15η ημέρα μετά τον ψεκασμό ήταν επίσης 66,87%.Ωστόσο, σε σύγκριση με τους χημικούς παράγοντες Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% (300mL/hm²), είχε καλή θανάτωση στις προνύμφες του spodoptera frugiperda, που μπορεί να μειώσει γρήγορα τον αριθμό του πληθυσμού των εντόμων.Η μέση επίδραση ελέγχου την 1η, 3η, 5η και 7η ημέρα μετά τη φαρμακευτική αγωγή ήταν 91,39%, 92,66%, 90,71% και 87,19% αντίστοιχα.Ωστόσο, η μέση επίδραση ελέγχου τη 10η ημέρα άρχισε να μειώνεται, μόνο στο 67,63%, και η μέση επίδραση ελέγχου τη 15η ημέρα είχε μειωθεί στο 51,60%.Δείτε τον Πίνακα 2 για λεπτομέρειες.

Ταυτόχρονα, διαπιστώσαμε επίσης ότι ο ρυθμός μείωσης του εντόμου στην περιοχή ελέγχου ήταν αρνητικός την 1η, 3η και 5η ημέρα μετά τη θεραπεία, υποδηλώνοντας αύξηση του αριθμού των εντόμων.Την 7η ημέρα μετά τη θεραπεία, άρχισε να γίνεται θετικός (ο πληθυσμός των εντόμων άρχισε να μειώνεται).Ο μέσος ρυθμός μείωσης του εντόμου τη 10η και 15η ημέρα ήταν 38,25% και 47,00% αντίστοιχα, γεγονός που σχετίζεται πολύ πιθανό με το γεγονός ότι ορισμένες από τις προνύμφες του spodoptera frugiperda άρχισαν να νυμφώνονται στο έδαφος και οι γενιές επικαλύπτονται μετά από 10-15 ημέρες .

Συνοπτικά, μπορεί να φανεί ότι τα 10 εκατομμύρια AcMNPV.Bt SC (1500 mL/hm²) έχει κάποια επίδραση ελέγχου στο spodoptera frugiperda, αλλά η επίδρασή του είναι αργή και η αποτελεσματικότητά του είναι περίπου 10-15 ημέρες μετά την εφαρμογή.

2.3 Επιδράσεις του AcMNPV.Bt σε φυσικούς εχθρούς

Κατά τη διάρκεια πειραμάτων πεδίου, τα αποτελέσματα 10 εκατομμυρίων AcMNPV.Η ανάρτηση Bt σε φυσικούς εχθρούς παρασίτων στο καλαμπόκι, όπως οι αράχνες, οι πασχαλίτσες και τα σκαθάρια, διερευνήθηκαν επίσης.Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι 10 εκατομμύρια AcMNPV.Η ανάρτηση Bt δεν είχε σημαντική ζημιά σε φυσικούς εχθρούς όπως οι αράχνες, οι πασχαλίτσες και τα σκαθάρια, με μέσο όρο 13,4 φυσικούς εχθρούς ανά 100 φυτά.Ωστόσο, οι χημικοί παράγοντες Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% εναιώρημα είχαν σημαντική τοξική επίδραση σε φυσικούς εχθρούς όπως οι αράχνες, οι πασχαλίτσες και τα σκαθάρια.Την πρώτη ημέρα μετά τη θεραπεία, ο μέσος αριθμός φυσικών εχθρών σε 100 φυτά καλαμποκιού ήταν μόνο 3,1 και την τρίτη ημέρα μετά τη θεραπεία, βρέθηκαν μόνο 5,2 φυσικοί εχθροί διαφόρων τύπων (Εικόνα 1).Μπορεί να φανεί ότι τα 10 εκατομμύρια AcMNPV.Η ανάρτηση Bt έχει καλή προστατευτική δράση στους φυσικούς εχθρούς των παρασίτων, ενώ η εναιώρηση Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% προκαλεί σχετικά μεγαλύτερη ζημιά στους φυσικούς εχθρούς.

2.4 Μοριακή ταυτοποίηση του AcMNPV

Τα αποτελέσματα ενίσχυσης PCR διαφορετικών δειγμάτων δοκιμής έδειξαν ότι τα θραύσματα ενίσχυσης των polh, lef-8 και lef-9 των δειγμάτων 1, 2, 3 και 4 ήταν συνεπή και σωστά σε μέγεθος.Τα προϊόντα PCR των γονιδίων polh, lef-8 και lef-9 ήταν 0,54, 0,716 και 0,29 kb, αντίστοιχα (Εικόνα 2), γεγονός που αποδεικνύει ότι το AcMNPV έχει εντομοκτόνο δράση έναντι των προνυμφών των spodoptera frugiperda.

Τέλος, το λογισμικό DNAMAN 6.0 χρησιμοποιήθηκε για την εκτέλεση της ευθυγράμμισης αλληλουχίας στα ενισχυμένα θραύσματα των polh, lef-8 και le.f-9 στα δείγματα 1, 2, 3 και 4 (Εικόνα 3).Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η ομοιότητα μεταξύ των ενισχυμένων αλληλουχιών των polh, lef-8 και lef-9 στα δείγματα 1, 2, 3 και 4 ήταν 100%, υποδεικνύοντας ότι τα δείγματα 1, 2, 3 και 4 προέρχονται όλα από τον ίδιο ιό AcMNPV.

3. Συζήτηση

Ο AcMNPV είναι ένας ιός σε σχήμα ράβδου εντόμου που μολύνει το σώμα των εντόμων μέσω της σίτισης.Ο ιός πολλαπλασιάζεται και εξαπλώνεται σε όλο το σώμα του εντόμου, μολύνοντας σταδιακά ολόκληρο το σώμα και τελικά οδηγεί στο θάνατο.Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης δείχνουν ότι το AcMNPV έχει καλή βιολογική δράση έναντι των προνυμφών του Spodoptera frugiperda.Το LC του την 7η και τη 10η ημέρα ήταν 4,1x107 και 2,9x107PIB/m, αντίστοιχα, και έδειξε καλά αποτελέσματα ελέγχου στο πεδίο.Το μικτό εναιώρημα 10 εκατομμυρίων AcMNPV.Bt (1500 mL/hm²) είχε καλές μέσες επιδράσεις ελέγχου τη 10η και 15η ημέρα μετά τη θεραπεία, φτάνοντας στο 68,99% και 66,87% αντίστοιχα, και ήταν ασφαλές για τους φυσικούς εχθρούς.Επομένως, η ταχύτητα έρευνας και ανάπτυξης θα πρέπει να επιταχυνθεί, ώστε το AcMNPV να μπορεί να διαδραματίσει μεγαλύτερο ρόλο στον βιολογικό έλεγχο του Spodoptera frugiperda.Το εναιώρημα 10 εκατομμυρίων AcMNPV.Bt που παράγεται από την Wuhan Chuqiang Biotechnology Co., Ltd. είναι μια ένωση του AcMNPV και του βιοπαρασιτοκτόνου Bacillus thuringiensis (Bt), το οποίο μπορεί να βελτιώσει σημαντικά την εντομοκτόνο δράση του ιού.Επειδή το Bt είναι ένα εντομοκτόνο ευρέος φάσματος με καλή μικροβιακή εντομοκτόνο δράση, όταν το AcMNPV συνδυάζεται με το Bt, η τοξικότητά του θα πρέπει να βελτιωθεί σημαντικά σε σύγκριση με ένα μόνο σκεύασμα.Αυτό όχι μόνο επεκτείνει το εντομοκτόνο εύρος του Bt, αλλά ενισχύει και την τοξικότητά του, επιτυγχάνοντας τον στόχο της χρήσης ενός μόνο σκευάσματος για τον έλεγχο πολλών παρασίτων.Αυτός είναι επίσης ο λόγος για τον οποίο η αναστολή των 10 εκατομμυρίων AcMNPV.Bt μπορεί να προωθηθεί ευρέως σε λαχανικά, οπωροφόρα δέντρα και ρύζι.Ως εκ τούτου, 10 εκατομμύρια AcMNPV.Bt μπορούν να προωθηθούν ως πράσινος παράγοντας ελέγχου για το Spodoptera frugiperda στον αραβόσιτο

Σε αυτή τη μελέτη, κατά τη διεξαγωγή δοκιμών αποτελεσματικότητας πεδίου, σε περίπτωση ταχείας μείωσης του πληθυσμού των εντόμων στην περιοχή ελέγχου (το ποσοστό μείωσης του εντόμου την 15η ημέρα έφτασε το 47,00%)), το μέσο αποτέλεσμα ελέγχου των 10 εκατομμυρίων AcMNPV.Bt εναιώρημα (1500mL/hm²) την 15η ημέρα μετά τη θεραπεία ήταν 66,87%, παρουσιάζοντας ταχεία ανοδική τάση.Ενώ η μέση επίδραση ελέγχου του χημικού φυτοφαρμάκου 15% methoxazole · indefencarb SC (300 mL/hm²) τη 15η ημέρα μετά τη θεραπεία μειώθηκε στο 51,60%.Αν και μπορεί να φανεί ότι το εναιώρημα 10 εκατομμυρίων AcMNPV.Bt (1500 mL/hm²) έχει κάποια επίδραση ελέγχου στο Spodoptera frugiperda τη 10η έως τη 15η ημέρα, λαμβάνοντας υπόψη την αργή αποτελεσματικότητα των βιολογικών φυτοφαρμάκων και τη σύντομη διάρκεια ζωής και τις επικαλυπτόμενες γενιές των προνυμφών Spodoptera frugiperda, συνιστάται η αύξηση του αριθμού των ερευνών και η παράταση του χρόνου έρευνας όταν διεξαγωγή δοκιμών επιτόπιας αποτελεσματικότητας βιολογικών φυτοφαρμάκων (ιδιαίτερα ιικών σκευασμάτων), που μπορεί να επιτύχουν πιο ιδανικά πειραματικά αποτελέσματα.Αυτός είναι επίσης ένας περιορισμός αυτής της μελέτης.Συνοπτικά, σε σύγκριση με τους βιολογικούς παράγοντες, οι χημικοί παράγοντες έχουν σχετικά υψηλότερη θανάτωση στα παράσιτα και δρουν γρήγορα.Μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως μέτρο πρόληψης και ελέγχου έκτακτης ανάγκης κατά τη διάρκεια επιδημιών παρασίτων.Όταν η βλάβη των παρασίτων συμβαίνει σχετικά ελαφρά, τα βιολογικά φυτοφάρμακα μπορούν να αντικαταστήσουν τα χημικά φυτοφάρμακα ως ένα από τα πράσινα μέτρα πρόληψης και ελέγχου, μειώνοντας έτσι την περιβαλλοντική ρύπανση και επιτυγχάνοντας το αποτέλεσμα της προστασίας της γεωργικής οικολογίας.

Επιπλέον, το γονίδιο Polh (πολυεδρίνη) που χρησιμοποιείται σε αυτή τη μελέτη είναι ένας τύπος πολυεδρικού προαγωγέα πρωτεΐνης, αυτός και το P10 είναι ο πιο συχνά χρησιμοποιούμενος προαγωγέας στο σύστημα φορέα έκφρασης βακουλοϊού (BEVS), και τα δύο εκφράζονται σε υψηλό βαθμό στο τελευταίο στάδιο της ιογενούς λοίμωξης^[13].Ωστόσο, η δραστικότητα του προαγωγέα ρ10 είναι χαμηλότερη από αυτή του προαγωγέα ροΙΗ, επομένως ο προαγωγέας ροΙχ χρησιμοποιείται συχνά για την έκφραση εξωγενών πρωτεϊνών.Το γονίδιο lef-8 μπορεί να κωδικοποιεί τη μεγαλύτερη υπομονάδα της RNA πολυμεράσης του ίδιου του ιού και είναι ένας τύπος όψιμου παράγοντα έκφρασης^[14].Το lef-9 είναι ένας τύπος όψιμου παράγοντα έκφρασης που κωδικοποιεί την υπομονάδα του συμπλέγματος πρωτεϊνών με τα lef-4, lef-8 και p47 σε βακουλοϊούς.Η έρευνα έχει βρει ότι οι ιοί που δεν έχουν το γονίδιο lef-9 δεν μπορούν να δημιουργήσουν σωματίδια ιού με μολυσματική δραστηριότητα, ενώ οι ιοί με το γονίδιο lef-9 μπορούν να αποκαταστήσουν τη μολυσματική δραστηριότητα του ιού αποκαθιστώντας τον.Επομένως, το γονίδιο lef-9 είναι ένα απαραίτητο γονίδιο για να σχηματίσει ο βακουλοϊός BV (Budded Virus) με μολυσματική δραστηριότητα^[15].Μπορεί να φανεί ότι τα γονίδια lef-8 και lef-9 έχουν υψηλό συντηρητισμό σε διαφορετικούς τύπους ιών πυρηνικής πολυέδρωσης, επομένως τα γονίδια lef-8 και lef-9 μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βάση για την αναγνώριση τύπων ιών.Επομένως, αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε τα polh, lef-8 και lef-9 ως αντικείμενα ανίχνευσης και μέσω της ευθυγράμμισης αλληλουχίας γονιδίων, η ομολογία ήταν υψηλή, φτάνοντας όλα το 100%.Η μέθοδος ταχείας μοριακής ανίχνευσης επαλήθευσε για άλλη μια φορά ότι το AcMNPV έχει καλή εντομοκτόνο δράση κατά του Spodoptera frugiperda, το οποίο είναι κατάλληλο για περαιτέρω προώθηση και εφαρμογή στην πρόληψη και τον έλεγχο του Spodoptera frugiperda.

Από το 2019, η Spodoptera frugiperda έχει εισβάλει στην Κίνα και έχει γίνει σημαντικό παράσιτο του καλαμποκιού.Έχει σχηματίσει έναν εγκατεστημένο πληθυσμό σε ορισμένες περιοχές της νότιας και νοτιοδυτικής Κίνας, προκαλώντας τεράστιες απώλειες στη βιομηχανία καλαμποκιού της Κίνας και απειλώντας σοβαρά την επισιτιστική ασφάλεια της Κίνας^[16].Αντιμέτωποι με την τρέχουσα σοβαρή κατάσταση πρόληψης και ελέγχου του Spodoptera frugiperda στην Κίνα, είναι επείγον να επιταχυνθεί ο έλεγχος και η ανάπτυξη αποτελεσματικών φυτοφαρμάκων για την πρόληψη και τον έλεγχο του Spodoptera frugiperda^[17].Αν και τα ιικά εντομοκτόνα έχουν περιορίσει την ευρεία εφαρμογή τους λόγω του αργού ρυθμού δράσης τους και του στενού εντομοκτόνου φάσματος, στο πλαίσιο της αυξανόμενης προσοχής στην οικολογία και την προστασία του περιβάλλοντος, το εντομοκτόνο βακουλοϊού αναμένεται να χρησιμοποιείται όλο και περισσότερο στη γεωργική παραγωγή λόγω των σημαντικών πλεονεκτημάτων τους έναντι παραδοσιακά φυτοφάρμακα.Λόγω της ευαισθησίας των παρασκευασμάτων του ιού των εντόμων σε εξωτερικές συνθήκες όπως η υψηλή θερμοκρασία, το ηλιακό φως, η βροχή και η ηλικία των παρασίτων[18].Ως εκ τούτου, συνιστάται η εφαρμογή φυτοφαρμάκων κατά την περίοδο αιχμής της εμφάνισης προνυμφών παρασίτων.Είναι καλύτερο να το χρησιμοποιείτε μετά τις 4:00-5:00 μ.μ. τις ηλιόλουστες μέρες για να αποφύγετε την επίδραση δυσμενών περιβαλλοντικών συνθηκών όπως η υψηλή θερμοκρασία και το φως, έτσι ώστε η σύνθεση του ιού να μπορεί να παίξει καλύτερα τον ρόλο της και να βελτιώσει την επίδραση ελέγχου στα παράσιτα. .